Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания животных – филиал Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Федеральный научный центр животноводства – ВИЖ имени академика Л.К. Эрнста»
Предложен усовершенствованный метод витрификации эмбрионов в открытых сверхтонких пластиковых капиллярах. Уравновешивание эмбрионов в среде витрификации осуществляли в два этапа: 1) в течение 2 мин в DPBS + 10% FCS + 7,5% этиленгликоль + 7,5% DMSO; 2) в течение 30-40 с в среде DPBS + 10% FCS + 16,5% этиленгликоль + 16,5% DMSO + 0,5 М сахароза; затем эмбрионы помещали в пластиковый капилляр и погружали в жидкий азот. Оттаивание и отмывание эмбрионов осуществляли в 3 этапа: 1) в течение 2,5 мин в DPBS + 10% FCS + 0,5 М сахароза; 2) в течение 2,5 мин в DPBS + 10% FCS + 0,25 М сахароза; 3) в течение 1 мин в DPBS + 10% FCS. При использовании этой схемы, витрификация эмбрионов мыши, находящихся на стадии 8-ми бластомеров и на стадии бластоцисты, не оказала отрицательного воздействия на их жизнеспособность. Витрификация одноклеточных и 4-клеточных эмбрионов снижала процент развившихся до стадии бластоцисты до 45,0 и 15,6% против 86,7 и 95,2% в контроле соответственно. Витрификация кроличьих эмбрионов на стадии бластоцист не оказала отрицательного воздействия на их жизнеспособность, в отличие от эмбрионов, находившихся на стадии 8-16 бластомеров; доля их, развившихся до стадии бластоцисты, была снижена до 62,5 против 100% в контроле соответственно. Предложенная схема витрификации позволяет без снижения жизнеспособности криоконсервировать мышиные эмбрионы на стадии 8-и бластомеров и бластоцисты, а кроличьи эмбрионы – на стадии бластоцисты.
1. Dinnyes A., Keefer C.L., Stice S.L., Solti L., Vajta G., Machaty Z., Rall W.F. Vitrification of IVMFC bovine embryos in VS3A and EFS solutions: a preliminary report //Theriogenology.− 1994.− Vol. 41.− P. 189.
2. Ishimori S.P., Takahashi Y., Kanagawa H. Factors affecting survival of mouse blastocysts vitrified by a mixture of ethylene glycol and DMSO // Theriogenology.− 1992.− Vol. 37.− P. 481-487.
3. Kasai M., Hamaguchi Y., Zhu S.E., Miyake T., Sakurai T., Machida T. High survival of rabbit morulae after vitrification in an ethylene glycol-based solution by a simple method // Biol. Reprod.− 1992.− Vol. 46.− P. 1042-1046.
4. Kasai M., Komi J.H., Takakamo A., Tsudera H., Sakurai T., Machida T. A simple method for mouse embryo cryopreservation in a low toxicity vitrification solution, without appreciable loss of viability // J. Reprod. Fertil.− 1990.− Vol. 89.− P. 91-97.
5. Kobayashi S., Nagashima H., Ymakawa H., Kato Y., Ogawa S. The survival of whole and bisected rabbit morulae after cryopreservation by vitrification method // Theriogenology.− 1990.− Vol. 33.− P. 777-788.
6. Kono T., Suzuki O., Tsunoda Y. Cryopreservation of rat blastocysts by vitrification // Cryobiology.− 1988.− Vol. 25.− P. 170-173.
7. Mazur P. Equilibrium, quasi-equilibrium, and nonequilibrium freezing of mammalian embryos // Cell Biophys. 1990.− Vol. 17.− P. 53-92.
8. Rall W.F. Factors affecting the survival of mouse embryos cryopreserved by vitrification // Cryobiology.− 1987.− Vol. 24.− P. 387-402.
9. Rall W.F., Fahy G.M. Ice-free cryopreservation of mouse embryos at -196°C by vitrification // Nature.− 1985.− Vol. 313.− P. 573-575.
10. Rall W.F., Polge C. Effect of warming rate on mouse embryos frozen and thawed in glycerol // J. Reprod. Fertil.− 1984.− Vol. 70.− P. 285-292.
11. Rall W.F., Reid D.S., Polge C. Analysis of slow-freezing injury of mouse embryos by cryomicroscopical and physiochemical methods // Cryobiology.− 1984.− Vol. 21.− P. 106-121.
12. Rall W.F., Wood M.J., Kirby C., Whittingham D.G. Development of mouse embryos cryopreserved by vitrification // J. Reprod. Fertil.− 1987.− Vol. 80.− P. 499-504.
13. Scheffen B., Van der Zwalmen P., Massip A. A simple and efficient procedure for preservation of mouse embryos by vitrification // Cryo. Lett.− 1986.− Vol. 7.− P. 260-269.
14. Schiewe M.C., Rall W.F., Stuart L.D., Wildt D.E. Analysis of cryoprotectant, cooling rate and in situ dilution using conventional freezing or vitrification for cryopreserving sheep embryos // Theriogenology.− 1991.− Vol. 36.− P. 279-293.
15. Vajta G. Vitrification of porcine embryos using open pulled straw method // Acta Vet. Scand.− 1997.− Vol. 17.− P. 191-195.
16. Whittingham D.G., Wood M., Farrant J., Lee H., Halsey J.A. Survival of frozen mouse embryos after rapid thawing from -196оC // J. Reprod. Fertil.− 1979.− Vol. 56.− P. 11-21.
17. Willadsen S.M. Factors affecting the survival of sheep embryos during deep freezing and thawing // The Freezing of Mammalian Embryos (K. Elliott, L. Whelan, Eds), Ciba Foundation Symposium 52. − Amsterdam: Elsevier, 1977.− P. 175-194.