Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания животных – филиал Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Федеральный научный центр животноводства – ВИЖ имени академика Л.К. Эрнста»
Цель работы исследование способности ооцитов КРС к ядерному созреванию in vitro при культивировании в среде с различными концентрациями фетальной сыворотки телят (FCS) КРС и выяснение характера влияния эстральной сыворотки коровы (ECS) на развитие in vitro оплодотворенных яйцеклеток КРС. Изучали способность ооцитов КРС к возобновлению мейоза и достижению стадии метафазы II в среде ТМС-199 с различными концентрациями фетальной сыворотки телят, а также характер влияния эстральной сыворотки на развитие in vitro оплодотворенных ооцитов в зависимости от времени её включения в синтетическую жидкость яйцевода, содержащую бычий сывороточный альбумин. В первой серии экспериментов показано, что в группах с 5 и 20% фетальной сыворотки мейоз возобновлял одинаковый процент ооцитов (93.4 и 93.2%, соответственно), но в группе с низкой концентрацией фетальной сыворотки все ооциты оставались на стадии метафазы I даже после 42 ч созревания in vitro, в то время как добавление 20% FCS позволило получить 51.7% ооцитов на стадии метафазы II. Затем оценивали ядерное созревание ооцитов КРС в среде с 10% и 20% фетальной сыворотки (лот сыворотки и среда те же самые, что и в предыдущих опытах). Между группами не наблюдали существенной разницы по проценту ооцитов, достигших стадии метафазы II (31.5 и 26.8%, соответственно). Во второй серии экспериментов изучали влияние времени включения эстральной сыворотки в культуральную среду (синтетическую жидкость яйцевода) на развитие эмбрионов крупного рогатого скота in vitro. Полученные результаты показывают, что ECS не оказывает ингибирующего влияния на первое деление дробления эмбрионов КРС. Но более позднее внесение ECS в культуральную среду (через 22 часа после начала культивирования), позволяет получить значительно больше эмбрионов на стадии бластоцисты и вылупившейся бластоцисты.
1. Кривохарченко А.С., Вильянович Л.И., Татаринова Л.В., Рябых В.П. Развитие мышиных эмбрионов in vitro в среде без белка в зависимости от количества зародышей в микрообъеме среды // Онтогенез. − 1993. − № 6. − С. 53-60.
2. Маленко Г.П., Сметанина И.Г., Иванова Л.Б. Устройство для выделения ооцитов из яичников млекопитающих. − Патент РФ № 95100852, 1997.
3. Сметанина И.Г., Татаринова Л.В., Кривохарченко А.С. Влияние состава культуральных сред на созревание ооцитов и развитие эмбрионов крупного рогатого скота in vitro // Онтогенез. − 2000. − № 2. − С. 139-143.
4. Сметанина И.Г., Татаринова Л.В., Кривохарченко А.С. Оплодотворение ооцитов крупного рогатого скота in vitro в безбелковой культуральной системе // Онтогенез. − 2006. − № 6. − 438-443.
5. Сметанина И.Г., Татаринова Л.В., Кривохарченко А.С. Влияние гормонов на созревание ооцитов крупного рогатого скота in vitro // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. − 2014. −№ 5. − С. 655-658.
6. Сметанина И.Г., Татаринова Л.В., Кривохарченко А.С. Влияние гипоксантина в низких концентрациях на созревание и оплодотворение ооцитов крупного рогатого скота in vitro // Известия РАН. Серия биологическая. − 2017. − № 5. − С. 1-4.
7. Bavister B.D., Leibfried M.L., Lieberman G. Development of preimplantation embryos of the golden hamster in a defined culture medium // Biol. Reprod. − 1983. − № 28. − С. 235-247.
8. Bavister B.D., Rose-Hellekant T., Pinyopummintr T. Development of in vitro matured/ in vitro fertilized bovine embryos into morulae and blastocyst in defined culture medium // Theriogenology. − 1992. − Vol. 28. − P. 127-146.
9. Bavister B.D., Yanagimachi R. The effect of sperm extract and energy sources on the motility and acrosome reaction of hamster sperm in vitro // Biol. Reprod. − 1977. − Vol. 16. − P. 228-237.
10. Carolan C., Lonergan P., Van Langendonckt A., Mermillod P. Factors affecting bovine embryo development in synthetic oviduct fluid following oocyte maturation and fertilization // Theriogenology. − 1995. − Vol. 43. − P. 1115-1128.
11. De Loos F., van Vliet C., van Mauric P., Kruip Th. A.M. Morphology of immature bovine oocytes // Gam. Res. − 1989. − Vol. 24. − P. 197-204.
12. Fukui Y., Ono H. Effects of sera, hormones and granulose cells added to culture medium for in vitro maturation, fertilization, cleavage and development of bovine oocytes // J. Reprod. Fertil. − 1989. − Vol. 86. − P. 501-506.
13. Kastrop P.M.M., Bevers M.M., Destree O.H.J., Kruip Th.A.M. Changes in protein synthesis and phosphorylation patterns during bovine oocyte maturation in vitro // J. Reprod. Fert. − 1990b. − Vol. 90. − P. 305-310.
14. Leibfried-Rutledge M.L., Crister E.S., First N.L. Effects of fetal calf serum and bovine serum albumin on in vitro maturation and fertilization of bovine and hamster cumulus-oocyte complexes // Biol. Reprod. − 1986. − Vol. 35. − P. 850-857.
15. Lonergan P., Carolan C., Mermillod P. Development of bovine embryos in vitro following oocytes maturation under defined conditions // Reprod. Nutrit. Develop. − 1994. − Vol. 34. − P. 329-339.
16. Parrish J.J., Susko-Parrish J.L., First N.L. Effect of heparin and chondroitin sulfate on the acrosome reaction and fertility of bovine sperm in vitro // Theriogenology. − 1985. − Vol. 24. − P. 537-549.
17. Parrish J.J., Susko-Parrish J.L., Leibfried-Rutledge M.L. et al. Bovine in vitro fertilization with frozen-thawed semen // Theriogenology. − 1986. − Vol. 25. − P. 591-600.
18. Pinyopummintr T., Bavister B.D. In vitro – matured / in vitro – fertilized bovine oocytes can develop into morulae/blastocysts in chemically defined, protein-free culture medium // Biol. Reprod. − 1991. − Vol. 45. − P. 736-742.
19. Pinyopummintr T., Bavister B.D. Development of bovine embryos in a cell-free culture medium; effects of type of serum, timing of its inclusion and heat-inactivation // Theriogenology. − 1994. − Vol. 41. − P. 1241-1249.
20. Rorie R.W., Lester T.D., Miller et al. Effect of protein source and coculture on bovine embryo development in synthetic oviductal fluid medium // Theriogenology. − 1994. − Vol. 42. − P. 385-395.
21. Saeki K., Hoshi M., Leibfried- Rutledge M.L., First N.L. In vitro fertilization and development of bovine oocytes matured in serum-free medium // Biol. Reprod. − 1991. − Vol. 44. − P. 256-260.
22. Saeki K., Leibfried- Rutledge M.L., First N.L. Are fetal calf serum and hormones necessary during in vitro maturation of cattle oocytes for subsequent development? // Theriogenology. −1990. − Vol. 33. − P. 316.
23. Sanbuissho A., Threfall W.R. The influence of serum and gonadotropins on bovine oocyte maturation in vitro // Theriogenology. − 1988. − Vol. 29. − P. 301.
24. Suss H., Wuthrich K., Stransinger J.G. Chromosome configurations and time sequence of the first meiotic division in bovine oocytes matured in vitro // Biol. Reprod. − 1988. − Vol. 38. − P. 871-880.
25. Tarkowski A.K. An air-drying method for chromosome preparation from mouse eggs // Cytogenetics. − 1966. − Vol. 5. − P. 394-400.
26. Tervit H.R., Whittingham D., Rowson I. Successful culture in vitro of sheep and cattle ova // J. Reprod. Fertil. − 1972. − Vol. 30. − P. 493-497.
27. Vanderhyden B.C., McLaughlin K.J., Rutledge J.M., Armstrong D.T. Using zona drilling to increase the penetrability of rat oocytes matured in vitro // Biol. Reprod. − 1989. −Vol. 40. − P. 953-960.
28. Yoshioka K., Othman., Tamiguchi T.et al. Differential pattern of blastulation in bovine morulae cultured in synthetic oviduct fluid medium containing FCS or BSA // Theriogenology. − 1997. − Vol. 48. − P. 997-1006.
29. Younis A.I., Brackett B.G., Fayrer-Hosken R.A. Influence of serum and hormones on bovine oocytes maturation and fertilization in vitro // Gam. Res. − 1989. − Vol. 23. − P. 189-201.