Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания животных – филиал Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Федеральный научный центр животноводства – ВИЖ имени академика Л.К. Эрнста»
Витрификация с использованием в качестве носителя триацетат-целлюлозных полых волокон является перспективным методом криоконсервации групп ооцитов и полученных in vitro (in vitro production,IVP) эмбрионов млекопитающих, позволяющим существенно упростить и стандартизировать процедуры витрификации/отогревания. В работе проведено сравнение эффективности данного носителя с носителями открытого типа (Cryotop, полусоломинка) при витрификации IVP-бластоцист и расширенных бластоцист крупного рогатого скота в возрасте семи суток. Уровень выживаемости эмбрионов, витрифицированных в полых волокнах, через 24 ч после отогревания был ниже (84%, P<0,05), чем на других носителях (97% на Cryotop и 94,3% на полусоломинке) и в контрольной группе (100%). Однако уровень выхода из блестящей оболочки эмбрионов из группы полого волокна в течение всего периода культивирования был сопоставим с аналогичными уровнями в других экспериментальных группах, а наибольшее снижение жизнеспособности наблюдалось у эмбрионов, витрифицированных с использованием полусоломинки. С целью оценки пригодности триацетат-целлюлозных волокон в качестве носителя для витрификации эмбрионов, получаемых при клонировании по методу zona-free, была проведена криоконсервация IVP-бластоцист и расширенных бластоцист крупного рогатого скота без блестящей оболочки. Уровень выживаемости витрифицированных эмбрионов без блестящей оболочки через 24 ч после отогревания (84,7%) был сопоставим с аналогичным показателем у витрифицированных интактных эмбрионов, но при этом наблюдалось увеличение среднего количества клеток с поврежденной мембраной.
1. Маленко Г.П., Корниенко Е.В., Косовский Г.Ю. Устройство для витрификации ооцитов и эмбрионов млекопитающих: патент РФ № 141452, 2014.
2. Маленко Г.П., Корниенко Е.В., Косовский Г.Ю. Система и устройство (варианты) для криоконсервации группы ооцитов и эмбрионов млекопитающих по методу витрификации при использовании в качестве носителя полого волокна: патент РФ № 2584584, 2016.
3. Abdalla H., Shimoda M., Hara H., Morita H., Kuwayama M., Hirabayashi M., Hochi S. Vitrification of ICSI- and IVF-derived bovine blastocysts by minimum volume cooling procedure: effect of developmental stage and age // Theriogenology. – 2010. – Vol. 74. – P. 1028-1035.
4. Bavister B.D., Yanagimachi R. The effects of sperm extracts and energy sources on the motility and acrosome reaction of hamster spermatozoa in vitro // Biol. Reprod. – 1977. – Vol. 16. – P. 228-237.
5. Beck A., Kurome M., Nagashima H., Reichenbach M., Reichenbach H.D., Wolf E. Hollow fiber vitrification of biopsied in vitro produced bovine blastocysts // Reprod. Biol. – 2013. – Vol. 13. – Suppl 2. – P. 57.
6. Blondin P. Status of embryo production in the world // Anim. Reprod. – 2015. – Vol. 12. – No. 3. – P. 356-358.
7. Bó G.A., Mapletoft R.J. Evaluation and classification of bovine embryos // Anim. Reprod. – 2013. – Vol. 10. – P. 344-348.
8. Choi J.K., Yue T., Huang H., Zhao G., Zhang M., He X. The crucial role of zona pellucida in cryopreservation of oocytes by vitrification // Cryobiology. – 2015. – Vol. 71. – No. 2. – P. 350-355.
9. Dinnyes A., Lonergan P., Fair T., Boland M.P., Yang X. Timing of the first cleavage post-insemination affects cryosurvival of in vitro-produced bovine blastocysts // Mol. Reprod. Dev. – 1999. – Vol. 53 – P. 318-324.
10. Do V.H., Walton S., Catt S., Taylor-Robinson A.W. Requirements for cryopreservation of in vitro-produced bovine embryos by a standard method of vitrification // J. Vet. Sci. Anim. Husb. – 2016.– Vol. 3. – No. 4. – P. 1-8.
11. Gong G., Dai Y., Fan B., Zhu H., Zhu S., Wang H., Wang L., Tang B., Li R., Wan R. et al. Birth of calves expressing the enhanced green fluorescent protein after transfer of fresh or vitrified/thawed blastocysts produced by somatic cell nuclear transfer // Mol. Reprod. Dev. – 2004. – Vol. 69. – P. 278-288.
12. Gutnisky C., Alvarez G.M., Cetica P.D., Dalvit G.C. Evaluation of the cryotech vitrification kit for bovine embryos // Cryobiology – 2013 – Vol. 67. – P. 391-393.
13. Hamawaki A., Kuwayama M., Hamano S. Minimum volume cooling method for bovine blastocyst vitrification // Theriogenology. – 1999. – Vol. 51 – P. 165.
14. Han Y.M., Yamashina H., Koyama N., Lee K.K., Fukui Y. Effects of quality and developmental stage on the survival of IVF-derived bovine blastocysts cultured in vitro after freezing and thawing // Theriogenology. – 1994. – Vol. 42 – P. 645-654.
15. Hasler J.F., Hurtgen P.J., Jin Z.Q., Stokes J.E. Survival of IVF-derived bovine embryos frozen in glycerol or ethylene glycol // Theriogenology. – 1997. – Vol. 46. – P. 563-579.
16. Kim Y.M., Uhm S.J., Gupta M.K., Yang J.S., Lim J-G., Das Z.C., Heo Y.T., Chung H-J., Kong I-K., Kim N-H., Lee H.T., Ko D.H. Successful vitrification of bovine blastocysts on paper container // Theriogenology. – 2012. – Vol. 78. – P. 1085-1093.
17. Kuwayama M., Vajta G., Ieda S., Kato O. Comparison of open and closed methods for vitrification of human embryos and the elimination of potential contamination // Reprod. Biomed. Online. – 2005. – Vol. 11. – P. 608-614.
18. Malenko G.P., Kornienko E.V., Nesterov I.I., Popov D.V., Kosovsky G.Y. Effect of the rewarming temperature on survival rate of IVP bovine embryos vitrified in triacetate cellulose hollow fiber incorporated into a new vitrification device // Anim. Reprod. – 2015. – Vol. 12. – No. 3. – P. 853.
19. Matsunari H., Maehara M., Nakano K., Ikezawa Y., Hagiwara Y., Sasayama N., Shirasu A., Ohta H., Takahashi M., Nagashima H. Hollow fiber vitrification: A novel method for vitrifying multiple embryos in a single device // J. Reprod. Dev. – 2012. – Vol. 58. – P. 599-608.
20. Nagashima H., Uchikura A., Maehara M., Hatae S., Nakano K. 2015. Direct comparison of the hollow-fiber vitrification and conventional vitrification methods // In: IFFS/JSRM International Meeting 26-29th April 2015. − Yokohama, Japan, 2015. − P. 24.
21. Nedambale T.L., Dinnyes A., Groen W., Dobrinsky J.R., Tian X.C., Yang X. Comparison on in vitro fertilized bovine embryos cultured in KSOM or SOF and cryopreserved by slow freezing or vitrification // Theriogenology. – 2004. – Vol. 62. – P. 437-449.