Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания животных – филиал Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Федеральный научный центр животноводства – ВИЖ имени академика Л.К. Эрнста»
Получены бактериальные продуценты рекомбинантных белков - производных поверхностного антигена Gc хантавируса Добрава, обладающие нормальной жизнеспособностью и обеспечивающие возможность очистки продукта. Полученный результат впервые экспериментально подтвердил теоретическую модель доменной организации белка Gc, в том числе, предположение о необходимости удаления из структуры рекомбинантного белка петли слияния, обладающей кинетизмом и склонной к взаимодействия с мембранами. Отработана система оценки выхода рекомбинантных белковых продуктов в растворимой форме in vivo на основе цветных флуоресцентных белков. Продукт конструкции pYNC-Dob, представляющей собой полноразмерный белок Gc, лишенный петли слияния, трансмембранного и цитоплазматического доменов и слитый с белком-носителем 6His-EYFP, накапливается в штамме-продуценте с выходом до 93 мг/л, причем доля растворимого продукта достигает 10%. Продукт флуоресцирует в полиакриламидном геле при использовании «квазиденатурирующего» метода обработки образцов.
1. Asaoka Y., Hatayama K., Ide T., Tsumoto K., Tomita M. The binding of soluble recombinant human Fcγ receptor I for human immunoglobulin G is conferred by its first and second extracellular domains. Mol. Immunol., 2013, 54(3-4): 403-407.
2. Chou S., Upton H., Bao K., Schulze-Gahmen U., Samelson A.J., He N., Nowak A., Lu H., Krogan N.J., Zhou Q., Alber T. HIV-1 Tat recruits transcription elongation factors dispersed along a flexible AFF4 scaffold. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2013, 110(2): E123-131.
3. Cong Q., Grishin N.V. MESSA: Meta-Server for protein sequence analysis. BMC Biol., 2012, 10: 82.
4. Elghanam M.S., Attia A.S., Shoeb H.A., Hashem A.E. Expression and purification of hepatitis B surface antigen S from Escherichia coli; a new simple method. BMC Res. Notes, 2012, 1; 5:125
5. Gong E.Y., Kenens H., Ivens T., Dockx K., Vermeiren K., Vandercruyssen G., Devogelaere B., Lory P., Kraus G. Expression and purification of Dengue virus NS5 polymerase and development of a high-throughput enzymatic assay for screening inhibitors of Dengue polymerase. Methods Mol. Biol., 2013, 1030: 237-247.
6. Hahn S. Structure and mechanism of the RNA polymerase II transcription machinery. Nat. Struct. Mol. Biol., 2004, 11: 394-403.
7. Hepojoki J., Strandin T., Vaheri A., Lankinen H. Interactions and oligomerization of hantavirus glycoproteins. J. Virol., 2010, 84: 227-242.
8. Hill H.E., Pioszak A.A. Bacterial expression and purification of a heterodimeric adrenomedullin receptor extracellular domain complex using DsbC-assisted disulfide shuffling. Protein Expr. Purif., 2013, 88(1): 107-113.
9. Karp R.L., Pérez M.M., Dasgupta T., Dickenstein A., Gunawardena J. Complex-linear invariants of biochemical networks. J. Theor. Biol., 2012, 311: 130-138.
10. Kesik-Brodacka M., Romanik A., Mikiewicz-Sygula D., Plucienniczak G., Plucienniczak A. A novel system for stable, high-level expression from the T7 promoter. Microb. Cell Fact., 2012, 11: 109.
11. Koch J., Liang M., Queitsch I., Kraus A.A., Bautz E.K. Human recombinant neutralizing antibodies against hantaan virus G2 protein. Virology, 2003, 308(1): 64-73.
12. Liew M.W., Rajendran A., Middelberg A.P. Microbial production of virus-like particle vaccine protein at gram-per-litre levels. J. Biotechnol., 2010, 150(2): 224-231.
13. Listwan P., Terwilliger T.C., Waldo G.S. Automated, high-throughput platform for protein solubility screening using a split-GFP system. J. Struct. Funct. Genomics, 2009, 10(1): 47-55.
14. Murphy K.F., Adams R.M., Wang X., Balázsi G., Collins J.J. Tuning and controlling gene expression noise in synthetic gene networks. Nucleic Acids Res., 2010, 38: 2712-2726.
15. Ozbudak E.M., Thattai M., Kurtser I., Grossman A.D., van Oudenaarden A. Regulation of noise in the expression of a single gene. Nat. Genet., 2002, 31: 69-73.
16. Pančík P., Bauerová-Hlinková V., Kúdelová M. Purification of recombinant M3 proteins of murine gammaherpesviruses 68 and 72 expressed in Escherichia coli. Acta Virol., 2013, 57(1): 59-68.
17. Qiu R., Sun B.G., Li J., Liu X., Sun L. Identification and characterization of a cell surface scavenger receptor cysteine-rich protein of Sciaenops ocellatus: bacterial interaction and its dependence on the conserved structural features of the SRCR domain. Fish Shellfish Immunol., 2013, 34(3): 810-818.
18. Reimer U., el Mokdad N., Schutkowski M., Fischer G. Intramolecular assistance of cis/trans isomerization of the histidine-proline moiety. Biochemistry, 1997, 36(45): 13802-13808.
19. Samanta D., Mukhopadhyay D., Chowdhury S., Ghosh J., Pal S., Basu A., Bhattacharya A., Das A., Das D., DasGupta C. Protein folding by domain V of Escherichia coli 23S rRNA: specificity of RNA-protein interactions. J. Bacteriol., 2008, 190(9): 3344-3352.
20. Samarkina O.N., Popova A.G., Gvozdik E.Y., Chkalina A.V., Zvyagin I.V., Rylova Y.V., Rudenko N.V., Lusta K.A., Kelmanson I.V., Gorokhovatsky A.Y, Vinokurov L.M. Universal and rapid method for purification of GFP-like proteins by the ethanol extraction. Protein Expr. Purif., 2009, 65(1): 108-113.