Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания животных – филиал Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Федеральный научный центр животноводства – ВИЖ имени академика Л.К. Эрнста»
ПОЛУЧЕНИЕ БЛАСТОЦИСТ МЫШИ В КУЛЬТУРАЛЬНЫХ СРЕДАХ ПОСЛЕ МИКРОИНЪЕКЦИИ В ПРОНУКЛЕУСЫ ЗИГОТ СМЕСИ ПЛАЗМИД ДЛЯ ЭКСПРЕССИИ КОМПОНЕНТОВ CRISPR/Cas9 СИСТЕМЫ
- Номер: 3
- Страницы: 106-110
Журнал: Проблемы биологии продуктивных животных
Аннотация:
Цель работы – исследовать способность зигот к развитию до стадии бластоцисты после микроинъекции в их пронуклеусы смеси плазмид для экспрессии компонентов CRISPR/Cas9 системы и культивирования на коммерческих средах. Донорами клеток были самки мышей линии C57BL6/CBA в возрасте 6-9 недель. В качестве манипуляционной среды использовалась коммерческая среда Global withHepes® с добавлением 10% заменителя сывороточного белка, а в качестве культуральной среды – Global® с добавлением 10% заменителя сывороточного белка. В результате получены данные, которые свидетельствуют о том, что исследованные среды могут быть успешно использованы для получения бластоцист. При культивировании после микроинъекции в течение суток вступили в развитие 84,5% эмбрионов, стадии компактной морулы достигли 52%, из них стадии бластоцисты – 92%. Заключили, что выход бластоцист от числа микроиъецированных зигот на уровне 44% достаточен для выполнения дальнейших работ по получению геномно-редактированных животных, продуцирующих рекомбинантные белки с молоком.
Литература:
1. Максименко О.Г., Дейкин А.В., Ходарович Ю.М., Георгиев П.Г. Использование трансгенных животных в биотехнологии: перспективы и проблемы // Acta naturae. – 2013. – Т. 5. – № 1. – C. 33-48.
2. Мензоров А.Г., Лукьянчикова В.А., Кораблев А.Н., Серова И.А., Фишман В.С. Практическое руководство по редактированию геномов системой CRISPR/Cas9 // Вавиловский журнал генетики и селекции. – 2016. – Т. 20. – № 6. – С. 930-944.
3. Немудрый А.А., Валетдинова К.Р., Медведев С.П., Закиян С.М. Системы редактирования геномов TALEN и CRISPR/Cas – инструменты открытий // Acta Naturae. – 2014. – Т. 6. – № 3. – С. 20-42.
4. Erwei Z., Yi-Jun C., Kui L. et al. One-step generation of complete gene knockout mice and monkeys by CRISPR/Cas9-mediated gene editing with multiple sgRNAs // Cell Research. – 2017. – Vol. 27. – P. 933-945.
5. Gordon J.W., Scangos G.A., Plotkin D.J., Barbosa J.A., Ruddle F.H. Genetic transformation of mouse embryos by microinjection of purified DNA // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. – 1980. – Vol. 77. – P. 7380-7384.
6. Miguel A., Gama S., Rita G., Gregory A. Animal transgenesis: an overview // Brain Struct. Funct. – 2010. – Vol. 214. – P. 91-109.
7. Yang X. Applications of CRISPR-Cas9 mediated genome engineering // Military Medical Research. – 2015. – Vol. 2. – P. 11. eCollection