Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания животных – филиал Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Федеральный научный центр животноводства – ВИЖ имени академика Л.К. Эрнста»
Исследовали интеграцию и тканеспецифическую экспрессию гена лактоферрина человека (чЛФ) в молочной железе трансгенных кроликов, полученных в результате микроинъекции в пронуклеусы зигот генно-инженерной конструкции, включающей ген hLF под промотором гена aS1-казеина крупного рогатого скота (aS1-Cn-hLf). Частота интеграции генно-инженерной конструкции aS1-Cn-hLF в геном кроличьих эмбрионов, достигших стадии бластоцисты, составила 40,9%. Интеграция трансгена в геном рождённого потомства варьировала в пределах 10,0-16,6%, а общая эффективность трансгеноза − 0,4-1,0%, в разных вариантах эксперимента. Из трёх первичных трансгенных кроликов только у одной крольчихи произошло встраивание трансгена в клетки всех трёх зародышевых листков. У двух других крольчат произошло мозаичное встраивание трансгена. Интеграция трансгена в геном крольчихи не повлияла отрицательно на воспроизводительную функцию у неё и её потомков (F1), − как женского, так и мужского пола. Передача трансгена по наследству, как в первом, так и во втором поколении происходит в пределах менделевского расщепления. У крольчат, рождённых первичной трансгенной крольчихой, наличие трансгена обнаруживается во всех исследованных органах и тканях. Концентрация чЛФ в молоке трансгенных крольчих (матери и дочерей) колебалась от 0,2 до 1,2 мкг/мл. Секреция чЛФ клетками секреторного эпителия молочной железы трансгенных крольчих более интенсивно происходила в начальный период лактации − в среднем до 21-25-го дня, а затем наблюдалось её постепенное снижение. Содержание чЛФ в молоке трансгенных крольчих снижается в каждую последующую лактацию. При этом снижение концентрации чЛФ происходит в молоке крольчих как гетерозиготных, так и гомозиготных по гену чЛФ.
1. Езерский В.А., Иванова Л.Б., Шевченко В.Г. Получение плазмиды, содержащей структурный ген лактоферрина человека под контролем регуляторных элементов гена αs1-казеина быка. Сб. науч. тр. ВНИИФБиП, 2004, 43: 52-67
2. Езерский В.А., Колоскова Е.М., Трубицина Т.П., Шевченко В.Г., Рябых В.П. Тест-система для определения лактоферрина человека в молоке кроликов с интегрированной в геном конструкцией aS1-Cn-hLf. Проблемы биологии продуктивных животных, 2012, 4: 108-118.
3. Зиновьева Н.А. Получение и молекулярно-генетический анализ трансгенных кроликов с тканеспецифическими для молочной железы генными конструкциями. Автореф. дисс... к.б.н., Дубровицы, 1994, 25 с.
4. Козикова Л.В. Структурно-функциональная организация хромосом и изменение генома у трансгенных сельскохозяйственных животных. Автореф. дисс...д.б.н., Санкт-Петербург, 2005, 35 с.
5. Немцова Е.Р., Иванова Л.М., Якубовская Р.И., Писаревский К.И., Воронин К.В., Шипулин А.Н., Стрижова Н.В. Иммуноферментный метод определения лактоферрина человека и его использование для диагностики гнойно-септических осложнений. Вопросы медицинской химии, 1995, 41(3): 58-61.
6. Плазмиды. Методы (ред. К. Харди). М.: Мир, 1990, 267 с.
7. Рябых В.П., Шишиморова М.С., Трубицина Т.П., Фаткулина О.Б., Тевкин С.И., Смеганина И.Г. Исследование физиолого-эмбриологических и молекулярно-биологических процессов, лежащих в основе трансгеноза у сельскохозяйственных животных. Труды регионального конкурса научных проектов РФФИ в области естественных наук. Калуга, 2007, 11: 451- 471.
8. Тевкин С.И., Трубицина Т.П., Шишиморова М.С., Езерский В.А., Рябых В.П. Частота интеграции трансгена и жизнеспособность кроличьих зигот, микроинъецированных разными генно-инженерными конструкциями. Технологии живых систем, 2010, 5: 42-49.
9. Эрнст Л.К., Прокофьев М.И., Захарченко В.И., Сураева Н.М., Мирошниченко С.И., БондаруВ.В., Лагутина И.С., Мезина М.Н. Получение трансгенных кроликов инъекцией генов в зиготы. Генноинженерные сельскохозяйственные животные, выпуск 1. М., 1995, 404 с.
10. Якубовская Р.И., Немцова Е.Р., Коростелева М.Д. К методике синтезааффинных сорбентов. Лабораторное дело, 1987, 7: 536-539.
11. Bijvoet A.G., Kroos M.A., Pieper F.R. Recombinant human acid alpha-glucosidase: high level produc-tion in mouse milk, biochemical characteristics, correction of enzyme deficiency in GSDII KO mice. Hum. Mol. Genet, 1998, 7: 1815-1824.
12. Brem G., Hartl P., Besenfelder U, Expression of synthetic cDNA sequences encoding human insulin-like growth factor-1 (IGF-1) in the mammary gland of transgenic rabbits. Gene, 1994a, 149: 351-355.
13. Brem G., Muller M. Large transgenic mammals. In: Animals with Novel Gene, 1994б: 179-245.
14. Brem G., Besenfelder U., Zinovieva N.A., Pfaller R. Mammary gland-specific expression of chymosin constructs in Тransgenic rabbits. Theriogenology, 1995, 43: 175-179.
15. Brem G., Besenfelder U., Castro F. and Muller M. Transgenesis in rabbits. In: Mammary Gland Transgenesis: therapeutic protein production (Eds F. Castro, J. Jaime). Berlin: Springer-Verlag and Landes Bioscience, 1998: 106-142.
16. Buhler T.A., Bruyere T., Went D.F. Rabbit beta-casein promoter directs secretion of human interleukin-2 into the milk of transgenic rabbits. Bio. Technology, 1990, 8: 140-143.
17. Burdon T.G., Wall R.J. Fate of microinjected genes in implantation mouse embryos. Mol. Reprod. Dev., 1992, 33: 436-442.
18. Chan A.W., Kukolj G., Skalka A.M. and Bremel R.D. Timing of DNA integration, transgenic mosaicism and pronuclear microinjection. Mol. Reprod. Dev., 1999, 52: 406-413.
19. Coulibaly S., Besenfelder U., Fleischmann M. Human nerve growth factor beta (hNGF-beta): mammary gland specific expression and production in transgenic rabbits. FEBS Lett., 1999, 44: 111-116.
20. Duby R.T., Cunniff M.B., Belak J.M. Effect of milking frequency on collection of milk from nursing New Zealand white rabbits. Anim. Biotechnol., 1993, 4: 31-42.
21. Evans M.J., Gilmour D.T., Colledge W.H. Transgenic rodents. In: Animal with novel genes (N. Maclean, Ed.). Cambridge: Cambridge University Press, 1994: 138- 178.
22. Galet C., Le Bourhis C.M., Chopineau M., Griec L.G., Perrin A., Magallon T., Altai J., Viglietta C., Houdebine L.M., Guillou F. Expression of a single beta/alpha chain protein of equine LH/CG in milk of transgenic rabbits and its biological activity. Mol. Cell. Endocrinol., 2000, 174: 31-40.
23. Goldman I.L., Georgieva S.G., Gurskiy Ya.G., Krasnov A.N.,Deykin A.V., Popov A.N., Ermolkevich T.G., Budzevich A.I., Chernousov A.D., Sadchikova E.R. Production of human lactoferrin in animal milk. Biochem. Cell Biol., 2012, 90: 513-519.
24. Hammer R.E., Pursel V.G., Rexroad C.E. Jr., Wall R.J., Bolt D.J., Ebert K.M., Palmiter R.D. and Brinster R.L. Production of transgenic rabbits, sheep and pigs by microinjection. Nature, 1985, 315: 680-683.
25. Hirabayashi M., Takahashi R., Ttod K., Kashiwazaki N., Hiracf M., Hirasawa' K.., Hochp S. and Uedad M. Comparative study on the integration of exogenous DNA into mouse, rat, rabbit and pig genomes. Exp. Anim., 2001, 50(2): 125-131.
26. Khodarovich Y.M., Vorob'eva N.E., Mezina M.N., Pinyugina M.V., Prokof ev M.I. and Larionov O.A. Expression of human interferon b in mammary glands of transgenic rabbits. Russian Journal of Bioorganic Chemistry, 2008, 34(2): 169-176.
27. Krimpenfort P., Rademakers A., Eyestone W. Generation of transgenic dairy cattle using «in vitro» embryo production. Bio. Technology, 1991, 9: 844 - 847.
28. Limonta J., Castro F., Martinez R., Purentes P., Ramos B., Aguilar A., Lleonart R., De Lafuente L.Transgenic rabbits as bioreactors for the production of human growth hormone. J. Biotechnol., 1995, 40: 49-58.
29. Massoud M., BischoffR., Dalemans W., Pointu H., Attal J., Schultz H., Clesse D., Stinnakre M.G., Pavinari A., Houdebine L.M. Expression of active recombinant human alpha 1-antitrypsin in trans-genie rabbits. J. Biotechnol., 1991, 18: 193-203.
30. Mead H., Gates L., Lacy E. Bovine alpha s1-casein gene sequences direct high level expression of active human urokinase in mouse milk. Bio. Technol., 1990, 8: 443-446.
31. Nakane P.K., Kawaoi A. Peroxidase-labeled antibody - a new method of conjugation. J. Histochem. Cytochem., 1974, 22: 1084 - 1091.
32. Palmiter R.D., Norstedt R.E. Metallothinein-human GH fusion gene stimulate growth of mice. Science, 1983, 222: 809-814.
33. Reigo E., Limonta J., Aguilar A. Production of transgenic mice and rabbits that carry and express the human tissue plasminogen activator cDNA under the control of a bovine alpha St casein promoter. Theriogenology, 1993, 39: 1173-1185.
34. Rodriguez A., Castro F., Aguilar A. Expression of active human erythropoietin in the mammary gland of lactating transgenic mice and rabbits. Biol. Res., 1995, 28: 141-153.
35. Wall R.J., Siedel G.E. Transgenic farm animals: a critical analysis. Theriogenology, 1992, 32: 337-357.
36. Wall R.J., Korr D.Ii., Bondioli K.R. Transgenic dairy cattle: genetic engineering on a large scale. J. Dairy Sci., 1997, 80: 2213-2224.
37. Wright G., Carver A., Cottom D., Reeves D., Scott A., Simons P., Wilmut I., Garner I., Colman A. High level expression of active human alpha- 1-antitrypsin in the milk of transgenic sheep. Bio. Technol., 1991, 9: 830-834.
38. Wolf E., Jehle P.M., Weber M.M., Sauerwein H., Daxenberger A., Breier B.H., Besenfelder U., Frenyo L., Brem G. Human insulin-like growth factor I (IGF-I) produced by the mammary glands of transgenic rabbits: yield, receptor binding, mitogenic activity, and effects on IGF-binding proteins. Endocrinology, 1997, 138: 307-313.