Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания животных – филиал Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Федеральный научный центр животноводства – ВИЖ имени академика Л.К. Эрнста»
По результатам рестриктного анализа потенциальных компонентов генно-инженерной конструкции основным вектором-носителем была выбрана плазмида рJET1.2/blunt. ПЦР-амплификат кДНК чЛФ клонировали в рJET1.2/blunt с получением плазмиды рJET1.2hLf. фрагменты 3’WAP и 5’WAP, вырезанные из полученных ранее промежуточных плазмид pTZ5’WAP и pTZ3’WAP, были последовательно клонированы в рjet1.2hlf.
Рестриктный и ПЦР-анализы подтвердили состав созданной плазмиды РWAPHLF. Линейная генная конструкция размером 4061 п.н. вырезается рестриктазами EagI (NotI) и ClaI, содержит 2136 п.н. кДНК чЛФ, левое и правое плечи гомологии гену кислого сывороточного белка мыши размером 945 и 980 п.н. соответственно. Полученную плазмиду (или линеаризованную генную конструкцию) предполагается использовать в качестве матрицы для замещения кодирующей последовательности гена mWAP на последовательность кДНК чЛФ по механизму прямой гомологичной рекомбинации с применением системы CRISPR/Cas9.
1. Езерский В.А., Иванова Л.Б., Шевченко В.Г. Получение плазмиды, содержащей структурный ген лактоферрина человека под контролем регуляторных элементов гена αs1-казеина быка // Сборник научных трудов ВНИИФБиП. – 2004. – Т. 43. – С. 52-67 .
2. Езерский В.А., Колоскова Е.М., Белова Н.В., Кутьин И.В., Рябых В.П. Клонирование нуклеотидных последовательностей 5’- и 3’-областей гена кислого сывороточного белка мыши для использования в генно-инженерных конструкциях, создаваемых на основе системы CRISPR/Cas9 // Проблемы биологии продуктивных животных. − 2018. − Т. 1. − С. 19-28
3. Baranyi M., Brignon G., Anglage P., Ribadeau-Dumas B. New data on the protein of rabbit (Oryctolagus cuniculus) milk // Comp. Biochem. Physiol. – 1995. – Vol. 111B. – P. 407-415.
4. Bichoff R., Degzuse E., Perraud F., Dalemans W., Ali-Hadji D., Thépot D., Devinoy E., Houdebine L.M., Pavirani A.. A 17,6 kb region located upstream of the rabbit WAP gene direct high-level expression of a functional human protein variant in transgenic mouser milk // FEBS. – 1992. – Vol. 305. – P. 265-268.
5. Boumahrou N., Andrei S., Miranda G., Henry C., Panthier J.J., Martin P., Bellier S.. The major protein fraction of mouse milk revisited using proven proteomic tools // J. Physiol. Pharmac. – 2009. – Vol. 60. – Suppl. 3. – P. 113-118.
6. Cooper C.A, Maga E.A, Murray J.D. Production of human lactoferrin and lysozyme in the milk of transgenic dairy animals: past, present, and future // Transgenic Res. – 2015. – Vol. 24. – No. 4. – P. 605-614. doi: 10.1007/s11248-015-9885-5.
7. Devinoy E., Malienou-N’Gassa R., Thepot D., Puissant C., Houdebine L.M. Hormone responsive elements within the upstream sequences of the rabbit whey acidic protein (WAP) gene direct chloramphenicol transferase (CAT) reporter gene expression in transfected rabbit mammary cells // Mol. Cell. Endocrin. – 1991. – Vol. 81. – P. 185-193.
8. Devinoy E., Thepot D., Stinnakre M.-G., Fontaine M.-L., Grabowski H., Puissant C., Pavirani A., Houdebine L.-M. High level production of human growth hormone in the milk of transgenic mice: the upstream region of the rabbit whey acidic protein (WAP) gene targets transgene expression to the mammary gland // Transg. Res. – 1994. – Vol. 3. – No. 2. – Р. 79-89.
9. Ebert K.M., Tullio P.Di, Barry C.A., Schindler J.E., Ayres S.L., Smith T.E., Pellerin L.J., Meade H.M., Denman J., Roberts B.. Induction of human tissue plasminogen activator in the mammary gland of transgenic goats // Nature Biotechn. – 1994. – Vol.12. – Р. 699-702. doi:10.1038/nbt0794-699
10. Ebert K.M., Selgrath J.P., DiTullio P., Denman J., Smith T.E. et al. Transgenic production of a variant of human tissue-type plasminogen activator in goat milk: generation of transgenic goats and analysis of expression // Biotechnology (NY). – 1991. –Vol. 9. – Р. 835-838.
11. Freitas V.J.F., Melo L.M., Batista R.I.T.P., Souza-Fabjan J.M.G., Teixeira D.I.A., Serova I.A., Andreeva L.E., Burkov I.A., Serov O.L. Goats (Capra hircus) as bioreactors for production of recombinant proteins interesting to pharmaceutical industry // Clon. Transgen. – 2014. – Vol. 3. – Р. 130. doi:10.4172/2168-9849.1000130
12. Gordon K., Lee E., Vitale J.A., Smith A.E., Westphal H., Hennighausen L. Production of human tissue plasminogen activator in transgenic mouse milk // Nature Biotechn. – 1987. – Vol. 5. – Р. 1183 - 1187. doi:10.1038/nbt1187-1183
13. Li S., Rosen J.M.. Nuclear factor I and mammary gland factor (STAT5) play a critical role in regulating rat whey acidic protein gene expression in transgenic mice // Mol. Cell Biol. – 1995. – Vol. 15. – Р. 2063-2070.
14. Lu D., Liu S., Ding F., Wang H., Li J., Li L., Dai Y., Li N.. Large-scale production of functional human lysozyme from marker-free transgenic cloned cows // Sci. Rep. – 2016. – Vol. 6. – Р.22947. doi: 10.1038/srep22947
15. Lu Y., Tian C., Deng J., Cheng X., Huang P. Establishment of La-tPA/G-CSF dual transgenic mice and expression in their mammary gland // Science in China (Series C). – 1999. – Vol. 42. – No 3. – Р. 330-336.
16. Massoud M., Attal J., Thépot D., Pointu H., Stinnakre M.G., Théron M.C., Lopez C.,. Houdebine L.M. The deleterious effects of human erythropoietin gene driven by the rabbit whey acidic protein gene promoter in transgenic rabbits // Reprod. Nutr. Dev. – 1996. – Vol. 36. – P. 555-563.
17. Millot B., Fontaine M.L., Thepot D., Devinoy E. A distal region, hypersensitive to DNase I, plays a key role in regulating rabbit whey acidic protein gene expression // Biochem. J. – 2001. – Vol. 359. –- P. 557-565.
18. Öztürk-Winder F., Renner M., Klein D., Müller M., Salmons B., Gu¨nzburg W.H. The murine whey acidic protein promoter directs expression to human mammary tumors after retroviral transduction // Cancer Gene Ther. – 2002. – Vol. 9. – Р. 421-431.
19. Shi G., Chen H., Wu X., Zhou Y., Liu Z., Zheng T., Huang P. A mWAP–hLF hybrid gene locus gave extremely high level expression of human lactoferrin in the milk of transgenic mice // Transgenic Res. − 2009. − Vol. 18. − P. 573-582.
20. Thépot D., Devinoy E., Fontaine M.L., Stinnakre M.G., Massoud M., Kann G., Houdebine L.M.. Rabbit whey acidic protein gene upstream region controls high-level expression of bovine growth hormone in the mammary gland of transgenic mice // Mol. Reprod. Dev. – 1995. – Vol. 42. – No. 3. – Р. 261-267.
21. Whitelaw C.B.A., Sheets T.P., Lillico S.G., Telugu B.P. Engineering large animal models of human disease // J. Pathol. – 2016. – Vol. 238. – Р. 247-256.